药物对离体豚鼠冠脉流量的影响

I.       目的

a)       掌握离体心脏灌流实验的方法

b)     观察药物对离体豚鼠心脏冠脉流量的影响

c)     学习自身对照t检验的统计方法

II.      原理

          i.   离体心脏实验最常用的方法：

a)       八木氏法

b)       Straub法

c)       Langendorff法

前两种方法适用于观察药物对两牺类动物青蛙、蟾蜍、等离体心脏，主要观察药物直接对心脏收缩力、传导与心输出量的影响。Langendorff法适用于研究药物对哺乳类动物兔、豚鼠、大白鼠和猫等离体心脏的影响，观察药物对心肌的直接作用，还可以观察药物对冠脉流量的影响。

        ii.   离体实验条件：供氧、供能、恒温、恒压

       iii.   冠脉循环的解剖特点：心肌的血液供应来自左右冠状动脉。冠状动脉的两个开口在主动脉根部动脉瓣上方，分别叫做左前窦、右后窦。左右冠状动脉及其分支的走向可有多种变异。左冠状动脉主要供应左心室的前部，右冠状动脉主要供应左心室的后部和右心室。左冠状动脉的血液流经毛细血管和静脉后，主要经由冠脉窦回流入右心房，而右冠状动脉的血液则主要经较细的心前静脉直接回流入右心房。另外还有一小部分冠脉血液可通过心最小静脉直接流入左、右心房和心室腔内。

      iv.   灌流方法：采用逆血流方向灌注营养液，主动脉瓣关闭，营养液经冠状动脉开口进入心脏冠脉循环，再经由左右心房、心室从上下腔静脉、肺静脉等断口处流出。

        v.   与冠脉流量相关因素： ，Q为冠脉流量，P为灌注压，R为冠脉阻力, 为粘滞系数， 为血管长度，r为血管半径。若P恒定， 不变，则Q与r成正比。

III.      材料：

                        i. 动物：豚鼠；标本：心脏

                      ii. 器材：恒温装置、供氧系统、恒压装置、主动脉套管、手术器械

                     iii. 药品：复方丹参注射液

　　　垂体后叶素0.1ug/ml

　　　异丙肾10ug/ml

IV.     方法：

                        i. 调节仪器：温度37±0.5℃，氧气2-3个/s，压力40-60cm水柱

                      ii. 制备标本：

a)       击昏豚鼠，剪胸部腹皮，自剑突处剪开胸骨，迅速打开胸腔，暴露心脏，，左手轻轻拿住心脏，剪断上下腔静脉、肺动脉、主动脉及心脏周围的组织，摘出心脏。

b)       用手指轻轻挤压心脏，使心室内残血排出

c)       去除心包膜，找到主动脉。

d)       修剪连接在心脏上的肺叶、气管等累赘物

e)       将主动脉挂在主动脉套管上，供给离体条件。

                     iii. 稳定标本

连续测定每分冠脉流量，连续三次测定结果相差不大于0.5ml为稳定。一般需5-10min.

                    iv. 给药：从侧枝沿营养液流向注射药物，快速推注，测定连续10min的每分冠脉流量，取极值计算。

a)       复方丹参注射液0.2ml

b)       垂体后叶素0.1ml

c)       异丙肾0.1ml

V.        结果处理

1.流量增减百分率＝

2.汇集全班数据进行自身对照t检验

配对设计主要有以下情形：

a)       两同质受试对象分别接受两种不同的处理

b)       同一受试对象分别接受两种不同处理

c)       同一受试对象（一种）处理前后

　检验步骤：

a)       无效假设：假设给药前后冠脉流量无变化

b)       计算t值

c)       确定P值

自由度n＝n-1

查附录１的表１查t_(n)0.05 ,t_(n)0.01

若t＞t_(n)0.05 或t_(n)0.01，P＜0.05或0.01反之亦然。

d)       判断结果

若P＞0.05，接受原假设，表示给药前后冠脉流量无显著差别。

若P＜0.05或0.01拒绝原假设，表示给药前后冠脉流量有显著差别

VI.     注意事项

a)       任洛氏液必须新鲜配制

b)       制备离体心脏标本时不要伤及窦房结，操作要迅速，剪尖朝上。

c)       主动脉套管必须排气泡，防止心脏血管被空气栓塞。

d)       主动脉应留长度0.5-1cm，插管不宜过深，以防堵住冠脉开口。

e)       操作时间不宜过长，注意营养液保持新鲜，挤出残血后需更换营养液，整个操作不能超过20min.